作者mathew12310 (修修)
看板Biotech
標題[求救] Western blotting的band呈現啞鈴形....
時間Sun May 16 16:54:13 2010
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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想問一下
為什麼我用western壓片出來的band都呈現啞鈴的形狀呢??
就是兩邊特別多~中間少~導致很像啞鈴的形狀
可否請問一下有誰知道~哪裡出了問題?
知道的說一下了~小弟感激不盡~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 125.231.209.65
1F：→ mathew12310:有人跟我說~是load蛋白的問題~不知道是不是這樣? 05/16 17:11
2F：→ mathew12310:還是有其他原因? 05/16 17:11
3F：推 tsubasawolfy:invitrogen protocol:Dumbbell shaped bands after 05/16 19:45
4F：→ tsubasawolfy:electrophoresis 05/16 19:45
5F：→ tsubasawolfy:Loading a large volume of sample causes 05/16 19:45
6F：→ tsubasawolfy:incomplete stacking of the entire sample. 05/16 19:46
7F：→ tsubasawolfy:This effect is more intensified for larger protei 05/16 19:46
8F：推 loham:上膠用更低的電壓慢慢跑,讓蛋白集得更好,大約50~60V試試吧! 05/17 01:11
9F：→ coogy:注意一下~你的抗體是不是 reuse 太多次了~ 05/17 09:10
10F：→ coogy:補一點新的抗體進去或許會好一點~ 05/17 09:10
11F：推 tsubasawolfy:不太懂REUSE跟啞鈴型之間有啥關連... 05/17 11:08
12F：推 icome:3樓是正解 我只有在做180kd的大蛋白才會發生! 05/17 11:30
13F：→ icome:可是lysate濃度不高 load太少又很難看見... 真是兩難 05/17 11:31
14F：→ celestial318:stacking久一點吧 05/17 12:42
15F：推 leoblack:3F正解,啞鈴形跟跑膠比較有關,跟Ab reuse不太有關係 05/17 14:47
16F：→ leoblack:如果非得load這麼濃/多的protein,那就再跑慢一點,會改善 05/17 14:48
17F：推 tsubasawolfy:商人:濃度不高是唄~(拿出spin型濃縮管 05/17 16:39