作者mathew12310 (修修)
看板Biotech
标题[求救] Western blotting的band呈现哑铃形....
时间Sun May 16 16:54:13 2010
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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想问一下
为什麽我用western压片出来的band都呈现哑铃的形状呢??
就是两边特别多~中间少~导致很像哑铃的形状
可否请问一下有谁知道~哪里出了问题?
知道的说一下了~小弟感激不尽~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 125.231.209.65
1F：→ mathew12310:有人跟我说~是load蛋白的问题~不知道是不是这样? 05/16 17:11
2F：→ mathew12310:还是有其他原因? 05/16 17:11
3F：推 tsubasawolfy:invitrogen protocol:Dumbbell shaped bands after 05/16 19:45
4F：→ tsubasawolfy:electrophoresis 05/16 19:45
5F：→ tsubasawolfy:Loading a large volume of sample causes 05/16 19:45
6F：→ tsubasawolfy:incomplete stacking of the entire sample. 05/16 19:46
7F：→ tsubasawolfy:This effect is more intensified for larger protei 05/16 19:46
8F：推 loham:上胶用更低的电压慢慢跑,让蛋白集得更好,大约50~60V试试吧! 05/17 01:11
9F：→ coogy:注意一下~你的抗体是不是 reuse 太多次了~ 05/17 09:10
10F：→ coogy:补一点新的抗体进去或许会好一点~ 05/17 09:10
11F：推 tsubasawolfy:不太懂REUSE跟哑铃型之间有啥关连... 05/17 11:08
12F：推 icome:3楼是正解 我只有在做180kd的大蛋白才会发生! 05/17 11:30
13F：→ icome:可是lysate浓度不高 load太少又很难看见... 真是两难 05/17 11:31
14F：→ celestial318:stacking久一点吧 05/17 12:42
15F：推 leoblack:3F正解,哑铃形跟跑胶比较有关,跟Ab reuse不太有关系 05/17 14:47
16F：→ leoblack:如果非得load这麽浓/多的protein,那就再跑慢一点,会改善 05/17 14:48
17F：推 tsubasawolfy:商人:浓度不高是呗~(拿出spin型浓缩管 05/17 16:39