這幾次我在製備上confocal的樣品時 遇到一些問題 想請問一下有製備過 confocal樣品的各位 我的研究系統是將細胞培養在膠體內 然後利用FDA/PI去進行 活/死細胞的染色 我的步驟 是將膠體以PBS清洗數次後 -->染色-->PBS wash-->mounting solution -->封片-->先上螢光顯微鏡觀察 到此為止觀察到的影像都ok(就是在gel內的細胞是一點一點綠色的) 隨後把樣品冰在-20度 -->上confocal前再以螢光顯微鏡觀察的時候 整個影像 變成綠色看不出 一點一點的細胞影像 後來嘗試把樣品冰在4度C 隨著時間變長 樣品的影像也逐漸變成整塊是綠色的 現在的困難點就是 confocal的預約時間不定 我無法要在上機前才製備樣品 不知道是否我的整個實驗過程是否有問題 查了一些文獻或者爬文 大家似乎都會先行將細胞固定 請問這個步驟是必須的嗎 用意為啥?冰在-20度C 都說樣品可以保存一個月但是我的樣品不到幾天原有的 影像變成整個綠的 補充一下 我的mounting solution是用90% glycerol以及0.1%的PPD所配成的 pH在8.5左右 先謝過看此文並回文的各位~~ --

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