作者shufa (123)
看板Biotech
标题[求救] 上confocal的样品处理
时间Sat May 8 15:28:37 2010
这几次我在制备上confocal的样品时 遇到一些问题 想请问一下有制备过
confocal样品的各位
我的研究系统是将细胞培养在胶体内 然後利用FDA/PI去进行 活/死细胞的染色
我的步骤 是将胶体以PBS清洗数次後 -->染色-->PBS wash-->mounting solution
-->封片-->先上萤光显微镜观察
到此为止观察到的影像都ok(就是在gel内的细胞是一点一点绿色的)
随後把样品冰在-20度 -->上confocal前再以萤光显微镜观察的时候 整个影像
变成绿色看不出 一点一点的细胞影像
後来尝试把样品冰在4度C 随着时间变长 样品的影像也逐渐变成整块是绿色的
现在的困难点就是 confocal的预约时间不定 我无法要在上机前才制备样品
不知道是否我的整个实验过程是否有问题
查了一些文献或者爬文 大家似乎都会先行将细胞固定 请问这个步骤是必须的吗
用意为啥?冰在-20度C 都说样品可以保存一个月但是我的样品不到几天原有的
影像变成整个绿的
补充一下 我的mounting solution是用90% glycerol以及0.1%的PPD所配成的
pH在8.5左右
先谢过看此文并回文的各位~~
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◆ From: 120.126.97.76
1F：推 hughzero:可能冰过後有水气跑进玻片中，封片时把mounting solution 05/09 12:22
2F：→ hughzero:封後一点，另外冰过的玻片记得先让其退冰并把附着在玻片 05/09 12:23
3F：→ hughzero:上的雾气或水气擦试乾净，以免影响拍照 05/09 12:24