作者kennezoe ()
看板Biotech
標題[求救] 萃取動物組織DNA出現膠狀物
時間Fri May 7 11:33:32 2010
我們實驗室會剪老鼠尾巴來萃取DNA
方法是
1.尾巴剪碎，加入TNE buffer 300ul及proteinase K煮overnight
2.加Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol, 25:24:1 300ul mix後離心取上層，這步驟
做兩次
3.加Chloroform/Isoamyl Alcohol 24:1 300ul mix 後離心取上層，這步驟做兩次
4.加isopropanol(-20℃) 300ul invert
5.加70%ethanol(-20℃)invert
6.加100%ethanol(-20℃)invert
7.DNA pellet 乾燥後以TE buffer回溶
通常在加入isopropanol之後，就會有白色絲狀物出現，在離心後，會是白色的小pellet
貼附在eppendorf底部。
然而有時加入isopropanol，也會有白色絲狀物，但過一段時間或離心後，卻沉澱出透明
的膠狀物或是膠狀物包裹白色pellet，這種膠狀物比較大團又滑溜，有時可以回溶有時又
不行，取出來測的260/280 ratio也正常，可是用來PCR卻常失敗。
想請問大家，這種膠狀物到底是什麼東西，如果不是DNA，又要如何避免萃取到它?
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◆ From: 140.120.104.205
1F：→ aimin:protease K 可以加多一點 我的經驗代表protein沒digest完全 05/07 18:36