作者kennezoe ()
看板Biotech
标题[求救] 萃取动物组织DNA出现胶状物
时间Fri May 7 11:33:32 2010
我们实验室会剪老鼠尾巴来萃取DNA
方法是
1.尾巴剪碎，加入TNE buffer 300ul及proteinase K煮overnight
2.加Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol, 25:24:1 300ul mix後离心取上层，这步骤
做两次
3.加Chloroform/Isoamyl Alcohol 24:1 300ul mix 後离心取上层，这步骤做两次
4.加isopropanol(-20℃) 300ul invert
5.加70%ethanol(-20℃)invert
6.加100%ethanol(-20℃)invert
7.DNA pellet 乾燥後以TE buffer回溶
通常在加入isopropanol之後，就会有白色丝状物出现，在离心後，会是白色的小pellet
贴附在eppendorf底部。
然而有时加入isopropanol，也会有白色丝状物，但过一段时间或离心後，却沉淀出透明
的胶状物或是胶状物包裹白色pellet，这种胶状物比较大团又滑溜，有时可以回溶有时又
不行，取出来测的260/280 ratio也正常，可是用来PCR却常失败。
想请问大家，这种胶状物到底是什麽东西，如果不是DNA，又要如何避免萃取到它?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.205
1F：→ aimin:protease K 可以加多一点 我的经验代表protein没digest完全 05/07 18:36