作者bee921 (BEE)
看板Biotech
標題[討論] 冷凍解凍會對DNA濃度改變?
時間Wed Apr 28 21:59:52 2010
小弟目前利用luciferase來檢測promoter的活性
同一個promoter做serial deletion所以有4~5種plasmid constructs
因為這實驗plasmid濃度很重要(統一我都下1ug)
在第一次時 用nanodrop測過濃度後開始我的實驗
(平常儲存DNA聽建議都放-20)
所以在進行第二次實驗將DNA解凍後 想沒事說來測個濃度看看(不到一個禮拜)
硬生生有幾管濃度就是偏高跟偏低(差了快100多ng) 讓我有點傻眼
想說會不會是因為冷凍解凍的關係 還是我第一次沒重複測很多次
所以我重新在測很多次 確定濃度改變不大 完成我的實驗
(共做了兩次 DNA改存放在4度C 等到確定不用時 我才凍回-20)
隔了兩個禮拜多 重新解凍
心裡不安的又去測了一下濃度...
這次又有兩管DNA濃度不一樣了 Orz 但是其他管還蠻接近的
差了也是一兩百ng (機器才剛校正過)
誰能告訴我是怎麼回事嗎.....Q_Q
還是說我只要使用前都測一下濃度 然後在來調整我下的量就好勒
(自己想說是不是每次應該都要一樣勒)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.84.225
1F：→ hellheavn:我覺得1.準備時濃度預先提高 2.疑問是大大有先spin才測? 04/29 00:07
2F：→ bee921:h大 我的濃度都500ng/ul以上 所以下的量都是不到3ul 04/29 00:51
3F：→ bee921:我測之前有spin 不過倒是都放在冰上~不知道會不會影響 04/29 00:52
4F：→ chaunen:是抽大量時 沒溶完全嗎? 04/29 01:25
5F：→ hellheavn:我們家倒是有遇過大量抽失敗的經驗 04/29 10:10
6F：→ hellheavn:應該不會影響太大 回蜜蜂大 DNA的量夠做即可!! 04/29 10:11
7F：推 Fourfish:可能是blank的關係 你連blank一起冷凍解凍看看 04/29 13:34
8F：→ bee921:抽大量是用kit抽 溶得很好阿!所以h大覺得差1~2百沒關係囉? 04/29 20:50
9F：→ bee921:F大 我的blank是水(DNA用水elu) 不知道大家是不是用TE 04/29 20:51
10F：→ bee921:因為抽完太低可以濃縮一下 所以我大多都用水 04/29 20:51
11F：→ Fourfish:我的意思是 每次重取水做blank都會有些微差異 04/30 12:17
12F：→ bee921:這我倒沒想過 可是差到100~200ng...(而且還有其他管是準) 04/30 20:19
13F：→ Fourfish:如果你測DNA之前有稀釋的話 乘回稀釋倍數就會有明顯差異 05/01 15:15
14F：→ Fourfish:這只是我的經驗啦 發現每次重取水做blank會有差 05/01 15:16
15F：推 isdorothy:REPORT ASSAY有加renilla或beta-gal做internal control 05/22 23:12
16F：→ isdorothy:所以其實還好不是嗎＠＠ 05/22 23:12