作者bee921 (BEE)
看板Biotech
标题[讨论] 冷冻解冻会对DNA浓度改变?
时间Wed Apr 28 21:59:52 2010
小弟目前利用luciferase来检测promoter的活性
同一个promoter做serial deletion所以有4~5种plasmid constructs
因为这实验plasmid浓度很重要(统一我都下1ug)
在第一次时 用nanodrop测过浓度後开始我的实验
(平常储存DNA听建议都放-20)
所以在进行第二次实验将DNA解冻後 想没事说来测个浓度看看(不到一个礼拜)
硬生生有几管浓度就是偏高跟偏低(差了快100多ng) 让我有点傻眼
想说会不会是因为冷冻解冻的关系 还是我第一次没重复测很多次
所以我重新在测很多次 确定浓度改变不大 完成我的实验
(共做了两次 DNA改存放在4度C 等到确定不用时 我才冻回-20)
隔了两个礼拜多 重新解冻
心里不安的又去测了一下浓度...
这次又有两管DNA浓度不一样了 Orz 但是其他管还蛮接近的
差了也是一两百ng (机器才刚校正过)
谁能告诉我是怎麽回事吗.....Q_Q
还是说我只要使用前都测一下浓度 然後在来调整我下的量就好勒
(自己想说是不是每次应该都要一样勒)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.84.225
1F：→ hellheavn:我觉得1.准备时浓度预先提高 2.疑问是大大有先spin才测? 04/29 00:07
2F：→ bee921:h大 我的浓度都500ng/ul以上 所以下的量都是不到3ul 04/29 00:51
3F：→ bee921:我测之前有spin 不过倒是都放在冰上~不知道会不会影响 04/29 00:52
4F：→ chaunen:是抽大量时 没溶完全吗? 04/29 01:25
5F：→ hellheavn:我们家倒是有遇过大量抽失败的经验 04/29 10:10
6F：→ hellheavn:应该不会影响太大 回蜜蜂大 DNA的量够做即可!! 04/29 10:11
7F：推 Fourfish:可能是blank的关系 你连blank一起冷冻解冻看看 04/29 13:34
8F：→ bee921:抽大量是用kit抽 溶得很好阿!所以h大觉得差1~2百没关系罗? 04/29 20:50
9F：→ bee921:F大 我的blank是水(DNA用水elu) 不知道大家是不是用TE 04/29 20:51
10F：→ bee921:因为抽完太低可以浓缩一下 所以我大多都用水 04/29 20:51
11F：→ Fourfish:我的意思是 每次重取水做blank都会有些微差异 04/30 12:17
12F：→ bee921:这我倒没想过 可是差到100~200ng...(而且还有其他管是准) 04/30 20:19
13F：→ Fourfish:如果你测DNA之前有稀释的话 乘回稀释倍数就会有明显差异 05/01 15:15
14F：→ Fourfish:这只是我的经验啦 发现每次重取水做blank会有差 05/01 15:16
15F：推 isdorothy:REPORT ASSAY有加renilla或beta-gal做internal control 05/22 23:12
16F：→ isdorothy:所以其实还好不是吗＠＠ 05/22 23:12