作者aggaci (台南工作的基隆人)
看板Biotech
標題Re: western blot sample prepare
時間Tue Apr 27 21:00:29 2010
※ 引述《iris416 (Mei-Mei)》之銘言：
: 今天做了neutrophil 的sample prepare
: 預備接下來跑western
: 我們家的方式是用triton lysis buffer打破細胞讓protein溶出來
: 而整個prepare sample的流程是加完 triton lysis buffer
: 到protein定量, 最後加入sample buffer煮完後存在-20度冰箱
: 這些流程要在那一天以內一氣呵成
: 但今天因為有其他的事情只能加到lysis buffer那個步驟而無法繼續定量
: 所以我就先把加完lysis buffer的sample直接存到4度C冰箱等明天再繼續做
: (已經sonicate跟離心完取出上清液了)
: 我想問這樣子分開步驟隔天才定量是不是有影響到定量或最後WB結果?
: 我所知道有些實驗室是要跑SDS PAGE以前才會給protein加入sample buffer的
: 不知道這樣結果是不是會有差?
我建議你
真的要冰隔夜的話整個cell pellet拿去冰-80度
隔天再打破到做完
你這個做法若是看蛋白質表現還還沒什麼問題
但若是做IP之類的實驗 我還是建議你打破後就一直做到最後吧
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◆ From: 118.171.124.19
1F：推 bluecsky:我也建議不要想隔夜 做蛋白質的實驗最好能一路做到完 04/28 07:19
2F：→ bluecsky:最好把所有事情排開 一天一次做到底 不然重做會更幹 04/28 07:20
3F：→ bluecsky:還有如果真的想分兩天 那還不如先不要破菌 04/28 07:20
4F：→ bluecsky:破菌後那些protease就跟者出來混成一團 那就會很有趣... 04/28 07:21