作者aggaci (台南工作的基隆人)
看板Biotech
标题Re: western blot sample prepare
时间Tue Apr 27 21:00:29 2010
※ 引述《iris416 (Mei-Mei)》之铭言：
: 今天做了neutrophil 的sample prepare
: 预备接下来跑western
: 我们家的方式是用triton lysis buffer打破细胞让protein溶出来
: 而整个prepare sample的流程是加完 triton lysis buffer
: 到protein定量, 最後加入sample buffer煮完後存在-20度冰箱
: 这些流程要在那一天以内一气呵成
: 但今天因为有其他的事情只能加到lysis buffer那个步骤而无法继续定量
: 所以我就先把加完lysis buffer的sample直接存到4度C冰箱等明天再继续做
: (已经sonicate跟离心完取出上清液了)
: 我想问这样子分开步骤隔天才定量是不是有影响到定量或最後WB结果?
: 我所知道有些实验室是要跑SDS PAGE以前才会给protein加入sample buffer的
: 不知道这样结果是不是会有差?
我建议你
真的要冰隔夜的话整个cell pellet拿去冰-80度
隔天再打破到做完
你这个做法若是看蛋白质表现还还没什麽问题
但若是做IP之类的实验 我还是建议你打破後就一直做到最後吧
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◆ From: 118.171.124.19
1F：推 bluecsky:我也建议不要想隔夜 做蛋白质的实验最好能一路做到完 04/28 07:19
2F：→ bluecsky:最好把所有事情排开 一天一次做到底 不然重做会更干 04/28 07:20
3F：→ bluecsky:还有如果真的想分两天 那还不如先不要破菌 04/28 07:20
4F：→ bluecsky:破菌後那些protease就跟者出来混成一团 那就会很有趣... 04/28 07:21