作者what15 (小蛙)
看板Biotech
標題[求救] 如何使重組蛋白變成soluble protein
時間Sat Apr 24 19:30:15 2010
小妹目前在做重組蛋白的表現
使用的E.col為BL-21
vector為pET-20b
實驗到目前做的還蠻順利的
不過表現出來的蛋白會形成inclusion body
也有用denature buffer 純化出來
由於protein denature 後會影響protein activity
所以老闆希望我能想辦法讓recombinant protein直接變成 soluble
也就是維持它原有的蛋白質活性 ＝ ＝
因此叫我try induction condiction
實驗室目前沒有人做過這一部份（通常都是直接玩denature/renature)
所以對於這個挑戰還蠻頭大的
小妹自己有查過資料
有些paper是說可加入chaperon 、heat shock protein或是換plasmid等等
但看起來都挺複雜的＠＠
不曉得有沒有人做過類似的實驗或是有看過相關的paper（篇幅太大可寄站內信）
希望大家能幫小妹指點迷津
感謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.59.56
1F：→ turtle24:如果不改序列的話 可以先從低溫培養開始抓條件看看 04/24 19:48
2F：→ turtle24:16~20度(低溫) 25度(室溫) 誘導時間長短要抓抓看 04/24 19:49
3F：→ what15:目前正在try低溫的條件 只是想問一下除了降低溫度 04/24 20:56
4F：→ what15:shaker調慢 IPTG濃度降低的條件之外 04/24 20:57
5F：→ what15:是否還有其他的辦法呢? (謝謝) 04/24 20:57
6F：→ what15:另外請問一下 改序列的意思是?換vector? 04/24 20:58
7F：→ turtle24:接一些soluble tag之類的 有的可以幫助提高水溶性 04/24 21:23
8F：→ turtle24:或者是前面的signal peptide換成細菌的分泌蛋白 04/24 21:23
9F：推 iceking:換菌株比較快,多試幾種 04/24 22:10
10F：推 bluecsky:換vector基本上就是再換tag 或是換菌株 04/24 22:58