作者what15 (小蛙)
看板Biotech
标题[求救] 如何使重组蛋白变成soluble protein
时间Sat Apr 24 19:30:15 2010
小妹目前在做重组蛋白的表现
使用的E.col为BL-21
vector为pET-20b
实验到目前做的还蛮顺利的
不过表现出来的蛋白会形成inclusion body
也有用denature buffer 纯化出来
由於protein denature 後会影响protein activity
所以老板希望我能想办法让recombinant protein直接变成 soluble
也就是维持它原有的蛋白质活性 ＝ ＝
因此叫我try induction condiction
实验室目前没有人做过这一部份（通常都是直接玩denature/renature)
所以对於这个挑战还蛮头大的
小妹自己有查过资料
有些paper是说可加入chaperon 、heat shock protein或是换plasmid等等
但看起来都挺复杂的＠＠
不晓得有没有人做过类似的实验或是有看过相关的paper（篇幅太大可寄站内信）
希望大家能帮小妹指点迷津
感谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.59.56
1F：→ turtle24:如果不改序列的话 可以先从低温培养开始抓条件看看 04/24 19:48
2F：→ turtle24:16~20度(低温) 25度(室温) 诱导时间长短要抓抓看 04/24 19:49
3F：→ what15:目前正在try低温的条件 只是想问一下除了降低温度 04/24 20:56
4F：→ what15:shaker调慢 IPTG浓度降低的条件之外 04/24 20:57
5F：→ what15:是否还有其他的办法呢? (谢谢) 04/24 20:57
6F：→ what15:另外请问一下 改序列的意思是?换vector? 04/24 20:58
7F：→ turtle24:接一些soluble tag之类的 有的可以帮助提高水溶性 04/24 21:23
8F：→ turtle24:或者是前面的signal peptide换成细菌的分泌蛋白 04/24 21:23
9F：推 iceking:换菌株比较快,多试几种 04/24 22:10
10F：推 bluecsky:换vector基本上就是再换tag 或是换菌株 04/24 22:58