作者kappaher (惡靈退散)
看板Biotech
標題[求救] PBMC分離時出現結塊
時間Fri Apr 23 12:37:12 2010
我是用Ficoll-paque分離lymphocyte
只是分離的全血量很大(一次分離120ml)
取全血時有注意採血管內的血液沒有凝結的血塊
全血會先用添加heparin的PBS做稀釋
然後進行分層~
而後取出霧狀層以3倍體積的PBS/heparin清洗1次
離心後去上清液
之後用RPMI清洗pellet2次
而團塊就在換至RPMI清洗的狀態下產生的
團塊的樣子是黃色 有點像是脂肪組織的感覺 大小最大約0.5公分
用pipetteman沖散 會變小塊，但沒辦法完全打散
在顯微鏡下觀察 結塊的東西並不是細胞
樣子有點像沒有菌絲的黴菌
而細胞會被它包住 或者細胞會圍在團塊的外面~
有點困擾.. 因為數量還滿多 (怕會影響細胞計數、濃度)
不曉得有什麼方法可以改善?
不知道有做過PBMC分離的各位 是否也有遇到這樣的狀況
或是怎麼解決掉團塊出現的問題??
或是有可能是什麼問題所產生的?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.203.167
1F：→ ralphlee:看起來像是部分細胞死掉DNA所造成的 04/26 02:37
2F：→ ralphlee:建議操作時間在採血的24hr內 新鮮的血比較不會有這種狀況 04/26 02:39
3F：→ ralphlee:或是RBC lysis注意時間是否過長 祝實驗順利 04/26 02:40
4F：→ kappaher:血液是當天抽的~ 而且沒有進行lysis的步驟@@ 04/26 14:58