作者kappaher (恶灵退散)
看板Biotech
标题[求救] PBMC分离时出现结块
时间Fri Apr 23 12:37:12 2010
我是用Ficoll-paque分离lymphocyte
只是分离的全血量很大(一次分离120ml)
取全血时有注意采血管内的血液没有凝结的血块
全血会先用添加heparin的PBS做稀释
然後进行分层~
而後取出雾状层以3倍体积的PBS/heparin清洗1次
离心後去上清液
之後用RPMI清洗pellet2次
而团块就在换至RPMI清洗的状态下产生的
团块的样子是黄色 有点像是脂肪组织的感觉 大小最大约0.5公分
用pipetteman冲散 会变小块，但没办法完全打散
在显微镜下观察 结块的东西并不是细胞
样子有点像没有菌丝的霉菌
而细胞会被它包住 或者细胞会围在团块的外面~
有点困扰.. 因为数量还满多 (怕会影响细胞计数、浓度)
不晓得有什麽方法可以改善?
不知道有做过PBMC分离的各位 是否也有遇到这样的状况
或是怎麽解决掉团块出现的问题??
或是有可能是什麽问题所产生的?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.203.167
1F：→ ralphlee:看起来像是部分细胞死掉DNA所造成的 04/26 02:37
2F：→ ralphlee:建议操作时间在采血的24hr内 新鲜的血比较不会有这种状况 04/26 02:39
3F：→ ralphlee:或是RBC lysis注意时间是否过长 祝实验顺利 04/26 02:40
4F：→ kappaher:血液是当天抽的~ 而且没有进行lysis的步骤@@ 04/26 14:58