作者CCDMer (Best)
看板Biotech
標題[方法] 用enterokinase切protein的條件
時間Tue Apr 20 17:32:57 2010
各位板上高手
最近實驗遇到瓶頸,使用載體是pET系列, 想要把target protein前面
的一段thioredoxin用enterokinase(EK)切掉,但一直試不出EK的條件,
我的方法是把target protein用HIS tag方法純化出來後(有跑PAGE確定明顯有band)
加EK切 16'C 16hour後,跑PAGE完全沒band,室溫切16hour也是一樣沒band
真的找不到其他條件去切了,我找出幾個問題想問
1.實驗室的(SIGMA) enterokinase是固體,我用H2O去溶,這樣EK有活性嗎?
2.還是我直接破菌後不進行純化,破完菌切EK效果會比較好?
3.EK切完後還要再過一次colum純化,有什麼方法可以去掉potein中的EK?
感謝!!!
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◆ From: 140.127.215.32
1F：→ kotenka:sigma提供的datasheet是說要溶在enterokinase buffer裡， 04/20 20:16
2F：→ kotenka:如果是買enterokinase solution，datasheet提到是溶在 04/20 20:17
3F：→ kotenka:Tris-HCl, NaCl, CaCl2和glycerol。 04/20 20:17
4F：→ CCDMer:感謝~~k大建議容在哪種會比較好? 04/21 01:25
5F：→ kotenka:我沒用過這東西阿；上面提到的chemicals是全部加在一起， 04/21 03:04
6F：→ kotenka:你何不去sigma看看datasheet，濃度都寫得清清楚楚= = 04/21 03:04