作者CCDMer (Best)
看板Biotech
标题[方法] 用enterokinase切protein的条件
时间Tue Apr 20 17:32:57 2010
各位板上高手
最近实验遇到瓶颈,使用载体是pET系列, 想要把target protein前面
的一段thioredoxin用enterokinase(EK)切掉,但一直试不出EK的条件,
我的方法是把target protein用HIS tag方法纯化出来後(有跑PAGE确定明显有band)
加EK切 16'C 16hour後,跑PAGE完全没band,室温切16hour也是一样没band
真的找不到其他条件去切了,我找出几个问题想问
1.实验室的(SIGMA) enterokinase是固体,我用H2O去溶,这样EK有活性吗?
2.还是我直接破菌後不进行纯化,破完菌切EK效果会比较好?
3.EK切完後还要再过一次colum纯化,有什麽方法可以去掉potein中的EK?
感谢!!!
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◆ From: 140.127.215.32
1F：→ kotenka:sigma提供的datasheet是说要溶在enterokinase buffer里， 04/20 20:16
2F：→ kotenka:如果是买enterokinase solution，datasheet提到是溶在 04/20 20:17
3F：→ kotenka:Tris-HCl, NaCl, CaCl2和glycerol。 04/20 20:17
4F：→ CCDMer:感谢~~k大建议容在哪种会比较好? 04/21 01:25
5F：→ kotenka:我没用过这东西阿；上面提到的chemicals是全部加在一起， 04/21 03:04
6F：→ kotenka:你何不去sigma看看datasheet，浓度都写得清清楚楚= = 04/21 03:04