作者complexomic (複合質體)
看板Biotech
標題[討論] 有關Western的小問題
時間Fri Apr 16 12:19:10 2010
我目前想要收細胞下來，然後破細胞，收集胞內蛋白
之前跑2D是先將dish裡面的medium吸掉，再用PBS wash
然後加入ripa 500uL 下去破細胞，然後酒精沉澱
再用Rehydration buffer回溶，接著就上IEF，再上電泳
目前我要做western，實驗室其他有做western的人說
先不要把dish裡面的medium吸掉，而是先用PBS wssh
然後ripa量不要下這麼大，否則會影響接下來的western
我想請問，真的會影響嗎??? 我之前下這樣的量
2D跑起來也還OK，只是不知道western這樣做真的會影響嗎
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.101.28.123
1F：推 icome:沒差吧 我是不知道不吸medium的理由是啥? 04/16 19:17
2F：→ icome:破完細胞離心取上清液就好 不用酒精沉澱 04/16 19:18
3F：→ icome:RIPA量加多就蛋白比較稀 你可以定量一下通常每well 30-50ug 04/16 19:20