作者complexomic (复合质体)
看板Biotech
标题[讨论] 有关Western的小问题
时间Fri Apr 16 12:19:10 2010
我目前想要收细胞下来，然後破细胞，收集胞内蛋白
之前跑2D是先将dish里面的medium吸掉，再用PBS wash
然後加入ripa 500uL 下去破细胞，然後酒精沉淀
再用Rehydration buffer回溶，接着就上IEF，再上电泳
目前我要做western，实验室其他有做western的人说
先不要把dish里面的medium吸掉，而是先用PBS wssh
然後ripa量不要下这麽大，否则会影响接下来的western
我想请问，真的会影响吗??? 我之前下这样的量
2D跑起来也还OK，只是不知道western这样做真的会影响吗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.101.28.123
1F：推 icome:没差吧 我是不知道不吸medium的理由是啥? 04/16 19:17
2F：→ icome:破完细胞离心取上清液就好 不用酒精沉淀 04/16 19:18
3F：→ icome:RIPA量加多就蛋白比较稀 你可以定量一下通常每well 30-50ug 04/16 19:20