作者ooooh (學習是一種累積的過程)
看板Biotech
標題Re: [求救] 關於分polysome fraction的實驗
時間Wed Apr 14 20:35:40 2010
※ 引述《Lambe (落日殘紅始覺春空)》之銘言：
: 小弟我又來問問題了orz
: 先謝謝之前不吝給予指教的前輩們<(_._)>
: 目前在做sucrose gradient試圖看目標RNA，在不同的藥物刺激下，做出蛋白質的速率
: 是否有差異。(已經確定目標RNA的量在不同刺激下並沒有改變，但是蛋白質會有很明顯
: 的變化)。
: 我的問題是： 找來的protocol上面寫到，超高速離心完後，要用一台機器做
: fractionation。但這台機器還在船上.... 大概還要好一陣子才會送來。
: 我猜那台機器的原理應該只是測OD看total RNA而已(OD254)，所以想用手動的方式測。
: (如果這部分有錯還請各為前輩指正)。
: 目前sample已經手動分成約15個fraction，但是我不知道要怎樣測OD比較好。
: 我有想到兩個方法：
: 一個方法是拿分出來的fraction用實驗室的光度計直接測(未純化)，但是那台要用cuvet
: ，需要約1000mL的體積。可以每個fraction拿10uL+純水990uL下去測嗎?
: 還是說必須要先用TRIzol純化出total RNA再測?
: 另一個方法是去所上借nano-drop測(也未純化RNA)
: 另外Sucrose會不會影響測OD的結果呢?
: 麻煩大家了..
我之前的做法是每個fraction 200ul加200ul DEPC水測
測完以後可以用trizol去extract RNA
這些RNA可用來detect specific RNA種類by QPCR
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誰都可以看得出 我臉上滿是寂寞無奈
你卻用無情的眼神 放逐我到無窮的思念國度 獨自流浪
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 209.162.8.231
1F：推 Lambe:感謝 請問您的sample是來自一盤十公分dish的細胞嗎 還是更多 04/14 21:06
2F：→ ooooh:那要看你的cell type 基本上我是用500ug proteinlysate作 04/15 03:16