※ 引述《Lambe (落日残红始觉春空)》之铭言： : 小弟我又来问问题了orz : 先谢谢之前不吝给予指教的前辈们<(_._)> : 目前在做sucrose gradient试图看目标RNA，在不同的药物刺激下，做出蛋白质的速率 : 是否有差异。(已经确定目标RNA的量在不同刺激下并没有改变，但是蛋白质会有很明显 : 的变化)。 : 我的问题是： 找来的protocol上面写到，超高速离心完後，要用一台机器做 : fractionation。但这台机器还在船上.... 大概还要好一阵子才会送来。 : 我猜那台机器的原理应该只是测OD看total RNA而已(OD254)，所以想用手动的方式测。 : (如果这部分有错还请各为前辈指正)。 : 目前sample已经手动分成约15个fraction，但是我不知道要怎样测OD比较好。 : 我有想到两个方法： : 一个方法是拿分出来的fraction用实验室的光度计直接测(未纯化)，但是那台要用cuvet : ，需要约1000mL的体积。可以每个fraction拿10uL+纯水990uL下去测吗? : 还是说必须要先用TRIzol纯化出total RNA再测? : 另一个方法是去所上借nano-drop测(也未纯化RNA) : 另外Sucrose会不会影响测OD的结果呢? : 麻烦大家了.. 我之前的做法是每个fraction 200ul加200ul DEPC水测 测完以後可以用trizol去extract RNA 这些RNA可用来detect specific RNA种类by QPCR -- 谁都可以看得出 我脸上满是寂寞无奈 你却用无情的眼神 放逐我到无穷的思念国度 独自流浪 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 209.162.8.231