作者yae (yae)
看板Biotech
標題[求救] 測酵素活性時的buffer使用濃度
時間Wed Apr 14 19:20:20 2010
請問大家~在做酵素活性測試時會使用多少濃度的buffer呢?
我用50mM(total體積100ul)(這是參照paper的濃度)
老師覺得濃度不需要這麼濃~
叫我用5~10mM就好
雖然buffer只是用來穩定反應環境的pH
但5mM會不會太稀了呢?(5mM是現在使用的濃度)
所以想問問大家使用的濃度是多少呢?
謝謝
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◆ From: 140.121.200.192
1F：推 ko363630:感覺50mM太濃了 04/14 21:47
2F：推 raxjimmy:看你的酵素會不會受到離子濃度影響 還有酵素的sample本身 04/15 08:51
3F：推 raxjimmy:buffer濃度和pH值都是什麼狀況 酵素通常保存在 stable的 04/15 08:53
4F：推 raxjimmy:pH值環境 但是測活性的時候不一定會用同一個pH 如果不同 04/15 08:54
5F：推 raxjimmy:的話濃一點也還好吧 我是配50mM溶受質在用 04/15 08:56
6F：→ yae:我的酵素是保存在pH7的20mMTris-HCl中，但用一樣濃度的Tris去 04/15 19:29
7F：→ yae:OD值很不穩定，所以換了25mM MOPS+MES去測，值布會亂跳，但又 04/15 19:31
8F：→ yae:覺得濃度會部會低的好像有加跟沒加依樣~ 04/15 19:35
9F：→ yae:對了我說的25mM MOPS是stork 04/15 19:36
10F：推 raxjimmy:只要你的反應pH不會因為其他添加物而改變 buffer濃度就OK 04/17 20:13