作者tincta (somewhere)
看板Biotech
標題[求救] 細胞污染
時間Tue Apr 13 16:40:49 2010
我的問題是最近忽然間發生的...
先描述一下我的培養情形：
我養的細胞是乳癌細胞株MCF-7，
使用DMEM/F12培養，本身不加抗生素，
然而因為細胞株是Tet-off system，
所以有在maintain中加入2μg/ml的Doxycycline（Dox）
在實驗起始時以PBS wash 而後分成有Dox與單純以DMEM/F12無抗生素者培養，
誘導目標蛋白表現...
----以上是常態培養情形供參考
問題來了，
我上次是有發現我實驗起始後誘導到一半（全程應6天，但發生在第3天）
細胞會長得很快，而後就死了，DMDM/F12都變成黃色的，但是是澄清的，
細胞在盤底呈現一種白雲狀（就是形狀很像一塊一塊的白雲，但沒有飄起來），
如果去移動dish，這時細胞就會飄起來，使medium變成沙沙的，
這時候因為移動dish鏡檢有晃到，medium就變成混濁的了。
但是有含Dox的那一組則很正常（看起來）
（那時我懷疑是自己一開始種太多，而抗生素會稍微影響細胞生長，
誘導需6天，可能因此dish太滿）
於是我重新按照一樣的方法再作一次，發現一模一樣的事又發生了，
心裡很毛，所以重新解凍了，
新的細胞我解凍看起來很正常，貼的很好，
繼代一次之後，
我試著種較少細胞數，但隔天去看卻發現細胞不對勁，
我養的8盤DMDM/F12一樣都變成黃色的（但是澄清），
細胞在盤底再次呈現一種白雲狀，
移動dish鏡檢有晃到，medium就變成混濁的了。
鏡檢的時候看到的是有點霧霧的，只有少量細胞貼在上面。
請問各位先進，
這是代表什麼種類的污染？是漿霉菌嗎？
或者有什麼簡易的方法可確定？
另如何試著去看PBS和DMEM是否污染？
抱歉問題有點多，
謝謝各位。
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◆ From: 163.15.154.12
※ 編輯: tincta 來自: 163.15.154.12 (04/13 16:43)
1F：推 dumb0101:聽起來像水黴 04/13 16:44
2F：→ turtle24:medium分別加你加過的東西 放幾天看看會不會長出東西 04/13 16:48
3F：推 wuzer:我也覺得是水黴，PBS、DMEM、細胞培養箱都得檢查清洗 04/13 18:41
4F：推 reinherd:建議你不要去試了 可能有問題的通通扔掉 04/13 23:47
5F：推 iceking:直接重配medium 重新解凍細胞吧! 04/14 13:12
6F：推 ATPase:有點像yeast或是黴菌耶 Orz 04/14 13:58
7F：→ tincta:感謝大家～泣 04/14 15:12