作者tincta (somewhere)
看板Biotech
标题[求救] 细胞污染
时间Tue Apr 13 16:40:49 2010
我的问题是最近忽然间发生的...
先描述一下我的培养情形：
我养的细胞是乳癌细胞株MCF-7，
使用DMEM/F12培养，本身不加抗生素，
然而因为细胞株是Tet-off system，
所以有在maintain中加入2μg/ml的Doxycycline（Dox）
在实验起始时以PBS wash 而後分成有Dox与单纯以DMEM/F12无抗生素者培养，
诱导目标蛋白表现...
----以上是常态培养情形供参考
问题来了，
我上次是有发现我实验起始後诱导到一半（全程应6天，但发生在第3天）
细胞会长得很快，而後就死了，DMDM/F12都变成黄色的，但是是澄清的，
细胞在盘底呈现一种白云状（就是形状很像一块一块的白云，但没有飘起来），
如果去移动dish，这时细胞就会飘起来，使medium变成沙沙的，
这时候因为移动dish镜检有晃到，medium就变成混浊的了。
但是有含Dox的那一组则很正常（看起来）
（那时我怀疑是自己一开始种太多，而抗生素会稍微影响细胞生长，
诱导需6天，可能因此dish太满）
於是我重新按照一样的方法再作一次，发现一模一样的事又发生了，
心里很毛，所以重新解冻了，
新的细胞我解冻看起来很正常，贴的很好，
继代一次之後，
我试着种较少细胞数，但隔天去看却发现细胞不对劲，
我养的8盘DMDM/F12一样都变成黄色的（但是澄清），
细胞在盘底再次呈现一种白云状，
移动dish镜检有晃到，medium就变成混浊的了。
镜检的时候看到的是有点雾雾的，只有少量细胞贴在上面。
请问各位先进，
这是代表什麽种类的污染？是浆霉菌吗？
或者有什麽简易的方法可确定？
另如何试着去看PBS和DMEM是否污染？
抱歉问题有点多，
谢谢各位。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.154.12
※ 编辑: tincta 来自: 163.15.154.12 (04/13 16:43)
1F：推 dumb0101:听起来像水霉 04/13 16:44
2F：→ turtle24:medium分别加你加过的东西 放几天看看会不会长出东西 04/13 16:48
3F：推 wuzer:我也觉得是水霉，PBS、DMEM、细胞培养箱都得检查清洗 04/13 18:41
4F：推 reinherd:建议你不要去试了 可能有问题的通通扔掉 04/13 23:47
5F：推 iceking:直接重配medium 重新解冻细胞吧! 04/14 13:12
6F：推 ATPase:有点像yeast或是霉菌耶 Orz 04/14 13:58
7F：→ tincta:感谢大家～泣 04/14 15:12