作者Lambe (落日殘紅始覺春空)
看板Biotech
標題[求救] lentivirus infection問題
時間Thu Apr 8 21:57:07 2010
最近在弄lentivirus knockdown實驗，有兩個問題想請問板上前輩：
1. 如果要做double knockdown，是否只要同時產生兩個病毒，再同時感染一盤細胞即可?
目前手上是只有lentivirus的系統，所以可能會考慮用同種的virus包裹不同的shRNA
，這樣行的通嗎? 還是必須要不同的virus system?
2. 我的系統來自於中研院的RNAi core，之前也想過把PGK-GFP的GFP切掉，換成我的基因
，但一直無法成功得到重組質體。利用限制酵素去切GFP，會多出一個比GFP還大一兩
百bp的亮帶，但是用RNAi core網站上給的PGK-GFP序列卻只會切出GFP。這樣是否表示
我的PGK-GFP有問題? 還是說真正的序列本來就跟網站上給的不一樣? 但是它真的會
表現GFP。 因為有搜尋到板上有前輩也曾經用過這個方法，不知道是不是也是用
pGKGFP這個載體呢?
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你是誰 我是山羌
沃!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.72.49
1F：→ leoblack:不行~一個細胞被一顆lenti感染後~就沒法再被第二顆感染了 04/08 23:34
2F：推 liuse:樓上是說 永遠嗎? 還是感染當下? 04/08 23:45
3F：→ liuse:因為我有做感染後select後再感染 OK 04/08 23:46
4F：→ liuse:同時丟兩種有帶GFP和DsRed的 也OK 同細胞有紅也有綠 04/08 23:46
5F：→ Lambe:是說對於同一種virus而言嗎? 有看過paper用不同的virus做 04/09 00:13
6F：→ oh:所以就不用算MOI嗎~最多就等於1~ 04/09 01:53
7F：推 ranilla:IPS不就是同時感染多達24種，才發現myc,oct3/4,sox2,klf4? 04/09 06:00
8F：推 leoblack:如果行的話,那plaque assay不就算心酸的?!雖然不同病毒 04/09 10:07
9F：→ soom:plaque assay會做序列稀釋就是怕高濃度的時候不只一顆 04/09 10:27
11F：→ ranilla:我不確定我有無誤解，但這篇文章應該就是單一細胞 04/09 10:59
12F：→ ranilla:同時感染多種單一病毒 04/09 11:00
13F：推 angeline670:但若同種病毒去感染要怎麼做篩選??抗生素都是一樣的呀 04/09 11:37
14F：推 nk12914:一個細胞應該是可以被好幾顆感染吧?!不然幹麻還要測titer 04/09 11:54
15F：→ nk12914:定MOI呢? 我的觀念是這樣，有誤也請大家多指教 04/09 11:54
16F：推 liuse:我的觀念是可以 但MOI大到一個程度就只有病毒毒性的差別 04/09 14:18
17F：推 leoblack:不好意思~後來去查證了~這得考慮到病毒特性等種種因素 04/09 15:50
18F：→ leoblack:例如~有些病毒被A病毒感染後~就確定不能被B病毒感染 04/09 15:51
19F：→ leoblack:A病毒跟B病毒非同種病毒 04/09 15:51
20F：→ leoblack:另一種是同種病毒~但被一個病毒感染過後~第二個要感染成 04/09 15:52
21F：→ leoblack:功的機率會下降~因為細胞會啟動抗病毒機制~是種干擾機制 04/09 15:52
22F：→ leoblack:所以~只能說"感染效率會相對下降"~而非絕對不行~ 04/09 15:53
23F：→ leoblack:而lentivirus在求證過後~確定是可以同時感染的~ 04/09 15:54
24F：→ leoblack:不好意思~自己學藝不經,獻醜了~也感謝樓上幾位指教~ 04/09 15:54
25F：→ leoblack: 精 04/09 15:55