作者Lambe (落日残红始觉春空)
看板Biotech
标题[求救] lentivirus infection问题
时间Thu Apr 8 21:57:07 2010
最近在弄lentivirus knockdown实验，有两个问题想请问板上前辈：
1. 如果要做double knockdown，是否只要同时产生两个病毒，再同时感染一盘细胞即可?
目前手上是只有lentivirus的系统，所以可能会考虑用同种的virus包裹不同的shRNA
，这样行的通吗? 还是必须要不同的virus system?
2. 我的系统来自於中研院的RNAi core，之前也想过把PGK-GFP的GFP切掉，换成我的基因
，但一直无法成功得到重组质体。利用限制酵素去切GFP，会多出一个比GFP还大一两
百bp的亮带，但是用RNAi core网站上给的PGK-GFP序列却只会切出GFP。这样是否表示
我的PGK-GFP有问题? 还是说真正的序列本来就跟网站上给的不一样? 但是它真的会
表现GFP。 因为有搜寻到板上有前辈也曾经用过这个方法，不知道是不是也是用
pGKGFP这个载体呢?
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你是谁 我是山羌
沃!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.72.49
1F：→ leoblack:不行~一个细胞被一颗lenti感染後~就没法再被第二颗感染了 04/08 23:34
2F：推 liuse:楼上是说 永远吗? 还是感染当下? 04/08 23:45
3F：→ liuse:因为我有做感染後select後再感染 OK 04/08 23:46
4F：→ liuse:同时丢两种有带GFP和DsRed的 也OK 同细胞有红也有绿 04/08 23:46
5F：→ Lambe:是说对於同一种virus而言吗? 有看过paper用不同的virus做 04/09 00:13
6F：→ oh:所以就不用算MOI吗~最多就等於1~ 04/09 01:53
7F：推 ranilla:IPS不就是同时感染多达24种，才发现myc,oct3/4,sox2,klf4? 04/09 06:00
8F：推 leoblack:如果行的话,那plaque assay不就算心酸的?!虽然不同病毒 04/09 10:07
9F：→ soom:plaque assay会做序列稀释就是怕高浓度的时候不只一颗 04/09 10:27
11F：→ ranilla:我不确定我有无误解，但这篇文章应该就是单一细胞 04/09 10:59
12F：→ ranilla:同时感染多种单一病毒 04/09 11:00
13F：推 angeline670:但若同种病毒去感染要怎麽做筛选??抗生素都是一样的呀 04/09 11:37
14F：推 nk12914:一个细胞应该是可以被好几颗感染吧?!不然干麻还要测titer 04/09 11:54
15F：→ nk12914:定MOI呢? 我的观念是这样，有误也请大家多指教 04/09 11:54
16F：推 liuse:我的观念是可以 但MOI大到一个程度就只有病毒毒性的差别 04/09 14:18
17F：推 leoblack:不好意思~後来去查证了~这得考虑到病毒特性等种种因素 04/09 15:50
18F：→ leoblack:例如~有些病毒被A病毒感染後~就确定不能被B病毒感染 04/09 15:51
19F：→ leoblack:A病毒跟B病毒非同种病毒 04/09 15:51
20F：→ leoblack:另一种是同种病毒~但被一个病毒感染过後~第二个要感染成 04/09 15:52
21F：→ leoblack:功的机率会下降~因为细胞会启动抗病毒机制~是种干扰机制 04/09 15:52
22F：→ leoblack:所以~只能说"感染效率会相对下降"~而非绝对不行~ 04/09 15:53
23F：→ leoblack:而lentivirus在求证过後~确定是可以同时感染的~ 04/09 15:54
24F：→ leoblack:不好意思~自己学艺不经,献丑了~也感谢楼上几位指教~ 04/09 15:54
25F：→ leoblack: 精 04/09 15:55