作者jck0406 (jck)
看板Biotech
標題[求救] 有關Tricine-SDS-PAGE的Buffer。
時間Mon Mar 29 17:50:11 2010
大家好，目前我clone 一段蛋白質加fusion protein只有3.4 kDa
所以想用Tricine-SDS-PAGE來分析。
我看了一篇有關Tricine-SDS-PAGE protocol的paper有提到一段話。
http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.4.html
Mount the gels in the vertical electrophoresis apparatus (see EQUIPMENT),
and add anode buffer as the lower electrode buffer and cathode buffer as the
upper electrode buffer (anodes and cathodes are commonly marked
red and black, respectively, by the suppliers).
意思應該是指說：把SDS-PAGE電泳槽架好，然後電泳槽下面加入anode buffer，
上面則是加入cathode buffer，可是這樣子2種buffer不是會混在一起嗎? 因為我看完
整個protocol，感覺cathode buffer和anode buffer有點類似SDS-PAGE的running buffer
所以我這邊有點搞不太懂到底是怎麼一回事，
不知道各位跑Tricine-SDS-PAGE時是怎麼跑的?
還是跑電泳的時候不是加這些buffer?
謝謝^^
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.27.158
1F：推 pent:上下兩個buffer槽 03/29 19:55
2F：推 boblu:有一種電泳槽上下 buffer 分離 03/29 20:29
3F：→ jck0406:我是用bio-rad的系統，請問這是指裡面(中間)和外面的意思 03/29 20:41
4F：→ jck0406:嗎? 03/29 20:41
5F：→ jck0406:所以平常跑SDS-PAGE的電泳槽不能用嗎? 03/29 20:43
6F：推 jason0919:他指的就是裡外...內外buffer分隔 你要看電極線怎麼連的 03/29 21:10
7F：→ jason0919:內加cathode 外加anode 其實只差了SDS和一點比例而已 03/29 21:11
8F：→ jason0919:那篇我讀過 照他跑的真的跑很久..... 03/29 21:12
9F：推 yaliu:借問一下BioRad系統，我的槽裡面buffer跟外面buffer會混在 03/29 22:46
10F：→ yaliu:一起，就是如果注入內槽buffer，會流到外面來，那怎麼分？ 03/29 22:47
11F：→ yaliu:那照這篇paper方法，小片段的蛋白質染出來很清晰嗎？ 03/29 22:49
12F：推 jason0919:bio-rad不是內外要分開嗎...沒裝好漏出來了吧... 03/29 23:01
13F：→ jason0919:tricine gel是專門分開小分子蛋白的 操作適當的話至少 03/29 23:02
14F：→ jason0919:resolution會不錯吧 染的好不好 就看你們的染法了... 03/29 23:02
15F：→ jason0919:通常SDS-PAGE只要有load 1ug以上的量 都可以染的不錯 03/29 23:06
16F：推 iceking:bio-rad要放兩片才不會漏阿,不會裝的話call正茂業務... 03/30 00:41
17F：→ jck0406:我bio-rad也超常漏的，如果混在一起不就不能用了XD 03/30 00:45
18F：推 iceking:會漏是不正確的,你再裝裝看,不行call業務,不要怕 03/30 00:50
19F：→ iceking: 的話 03/30 00:51
20F：→ jck0406:好~再漏的話就摳業務 :P 03/30 11:42
21F：→ jck0406:另外我想問一下，anode and cathode buffer 可以reuse嗎? 03/30 11:45
22F：→ jck0406:因為TRICINE不便宜 XD 03/30 11:45