作者jck0406 (jck)
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标题[求救] 有关Tricine-SDS-PAGE的Buffer。
时间Mon Mar 29 17:50:11 2010
大家好，目前我clone 一段蛋白质加fusion protein只有3.4 kDa
所以想用Tricine-SDS-PAGE来分析。
我看了一篇有关Tricine-SDS-PAGE protocol的paper有提到一段话。
http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.4.html
Mount the gels in the vertical electrophoresis apparatus (see EQUIPMENT),
and add anode buffer as the lower electrode buffer and cathode buffer as the
upper electrode buffer (anodes and cathodes are commonly marked
red and black, respectively, by the suppliers).
意思应该是指说：把SDS-PAGE电泳槽架好，然後电泳槽下面加入anode buffer，
上面则是加入cathode buffer，可是这样子2种buffer不是会混在一起吗? 因为我看完
整个protocol，感觉cathode buffer和anode buffer有点类似SDS-PAGE的running buffer
所以我这边有点搞不太懂到底是怎麽一回事，
不知道各位跑Tricine-SDS-PAGE时是怎麽跑的?
还是跑电泳的时候不是加这些buffer?
谢谢^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.27.158
1F：推 pent:上下两个buffer槽 03/29 19:55
2F：推 boblu:有一种电泳槽上下 buffer 分离 03/29 20:29
3F：→ jck0406:我是用bio-rad的系统，请问这是指里面(中间)和外面的意思 03/29 20:41
4F：→ jck0406:吗? 03/29 20:41
5F：→ jck0406:所以平常跑SDS-PAGE的电泳槽不能用吗? 03/29 20:43
6F：推 jason0919:他指的就是里外...内外buffer分隔 你要看电极线怎麽连的 03/29 21:10
7F：→ jason0919:内加cathode 外加anode 其实只差了SDS和一点比例而已 03/29 21:11
8F：→ jason0919:那篇我读过 照他跑的真的跑很久..... 03/29 21:12
9F：推 yaliu:借问一下BioRad系统，我的槽里面buffer跟外面buffer会混在 03/29 22:46
10F：→ yaliu:一起，就是如果注入内槽buffer，会流到外面来，那怎麽分？ 03/29 22:47
11F：→ yaliu:那照这篇paper方法，小片段的蛋白质染出来很清晰吗？ 03/29 22:49
12F：推 jason0919:bio-rad不是内外要分开吗...没装好漏出来了吧... 03/29 23:01
13F：→ jason0919:tricine gel是专门分开小分子蛋白的 操作适当的话至少 03/29 23:02
14F：→ jason0919:resolution会不错吧 染的好不好 就看你们的染法了... 03/29 23:02
15F：→ jason0919:通常SDS-PAGE只要有load 1ug以上的量 都可以染的不错 03/29 23:06
16F：推 iceking:bio-rad要放两片才不会漏阿,不会装的话call正茂业务... 03/30 00:41
17F：→ jck0406:我bio-rad也超常漏的，如果混在一起不就不能用了XD 03/30 00:45
18F：推 iceking:会漏是不正确的,你再装装看,不行call业务,不要怕 03/30 00:50
19F：→ iceking: 的话 03/30 00:51
20F：→ jck0406:好~再漏的话就抠业务 :P 03/30 11:42
21F：→ jck0406:另外我想问一下，anode and cathode buffer 可以reuse吗? 03/30 11:45
22F：→ jck0406:因为TRICINE不便宜 XD 03/30 11:45