作者longko (觀音兵)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請問lentivius的問題~~十萬火急~~畢業困難
時間Sat Mar 27 22:03:07 2010
我是指transfection 中研院買的shRNA到HEK293T細胞裡，只transfect一個質體進入細胞裡，打算做個測試，看48H後蛋白是否會下降。結果並無影響。
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◆ From: 134.208.25.184
1F：→ turtle24:EGFP有亮嗎? 03/27 22:52
2F：推 migrant:建議同時定序你的plasmids 有時候拿到的clone會出錯 03/28 01:14
3F：→ longko:有定序過，pEGFP transfection有發亮 03/28 14:42
4F：推 sweetE:那這跟lentivirus就沒有任何關係了啊~and 這個plasmid 03/28 15:37
5F：→ sweetE:本來就是設計在Lenti的system上用的,直接用效果並不好,實驗 03/28 15:39
6F：→ sweetE:室曾經也這樣試過,最後還是PACKAGE成VIRUS 03/28 15:39
7F：→ chaunen:我也想問 為啥直接用效果會不好呢? GFP會亮阿 03/28 18:44
8F：推 aceliang:跟U6 promoter不知道有沒有關係。 03/28 18:54
9F：→ chaunen:哎呀 我的promoter是CMV(我以為GFP都很亮就OK說@@" ) 03/28 19:13
10F：→ chaunen:不就表示單單送入這個plasmid 就能產生protein嗎? 03/28 19:14
11F：→ chaunen:我把GFP剪下來換上我的taget gene... 03/28 19:14
12F：推 migrant:plasmids送進去以後做出的shRNA是造成mRNA degradation 03/28 19:57
13F：→ migrant:要是你的protein比較stable的話 或許效果就會比較慢看見? 03/28 19:58
14F：→ chaunen:歹勢..我跟原PO不一樣 我做over-expression XD" 03/28 20:36
15F：推 icome:之前有討論過 你要嘛直接挑stable不然就做viral infection 03/29 09:07
16F：→ icome:想直接transient送進去效果都很差 03/29 09:07
17F：推 sweetE:跟PROMOTER應無關係~U6 promoter本來就是for polymeraseIII 03/30 23:26
18F：→ sweetE:你不管用什麼方式送進去 還不都一樣會表現 03/30 23:27
19F：→ sweetE:應該是Efficiency吧! 原po用什麼細胞做實驗? 03/30 23:27