作者longko (观音兵)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问lentivius的问题~~十万火急~~毕业困难
时间Sat Mar 27 22:03:07 2010
我是指transfection 中研院买的shRNA到HEK293T细胞里，只transfect一个质体进入细胞里，打算做个测试，看48H後蛋白是否会下降。结果并无影响。
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 134.208.25.184
1F：→ turtle24:EGFP有亮吗? 03/27 22:52
2F：推 migrant:建议同时定序你的plasmids 有时候拿到的clone会出错 03/28 01:14
3F：→ longko:有定序过，pEGFP transfection有发亮 03/28 14:42
4F：推 sweetE:那这跟lentivirus就没有任何关系了啊~and 这个plasmid 03/28 15:37
5F：→ sweetE:本来就是设计在Lenti的system上用的,直接用效果并不好,实验 03/28 15:39
6F：→ sweetE:室曾经也这样试过,最後还是PACKAGE成VIRUS 03/28 15:39
7F：→ chaunen:我也想问 为啥直接用效果会不好呢? GFP会亮阿 03/28 18:44
8F：推 aceliang:跟U6 promoter不知道有没有关系。 03/28 18:54
9F：→ chaunen:哎呀 我的promoter是CMV(我以为GFP都很亮就OK说@@" ) 03/28 19:13
10F：→ chaunen:不就表示单单送入这个plasmid 就能产生protein吗? 03/28 19:14
11F：→ chaunen:我把GFP剪下来换上我的taget gene... 03/28 19:14
12F：推 migrant:plasmids送进去以後做出的shRNA是造成mRNA degradation 03/28 19:57
13F：→ migrant:要是你的protein比较stable的话 或许效果就会比较慢看见? 03/28 19:58
14F：→ chaunen:歹势..我跟原PO不一样 我做over-expression XD" 03/28 20:36
15F：推 icome:之前有讨论过 你要嘛直接挑stable不然就做viral infection 03/29 09:07
16F：→ icome:想直接transient送进去效果都很差 03/29 09:07
17F：推 sweetE:跟PROMOTER应无关系~U6 promoter本来就是for polymeraseIII 03/30 23:26
18F：→ sweetE:你不管用什麽方式送进去 还不都一样会表现 03/30 23:27
19F：→ sweetE:应该是Efficiency吧! 原po用什麽细胞做实验? 03/30 23:27