作者longko (觀音兵)
看板Biotech
標題[求救] 請問lentivius的問題~~十萬火急~~畢業困難
時間Sat Mar 27 16:54:14 2010
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
板上各位好
最近~~我開始使用lentivirus 系統~~我從中研院訂購了幾組shRNA~~再lentivirus前
先將幾組shRNA利用transfection的方式將plasmid送到HEK-293T細胞，做knockdown
照理來說，會在western blot測試中，看到目標蛋白被抑制，可是幾次結果下來，
並未看出差異。
我是使用invitrogen的Lipofectamine 2000將plasmid送入細胞，48小時候收蛋白，
過程中並無篩許，只有對照pEGFP-plasmid做為control。
而這幾組shRNA中研院的測試結果都是有效的，所以在我pre-test的結果來看，該己
組shRNA就沒有效果，請問各位前輩我有沒有忽略什麼細節或少考慮了什麼。
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 134.208.25.184
1F：→ terp:lentivirus shRNA 用感染的效果比較會出來,transfect比較沒用 03/27 17:07
2F：推 aceliang:packaging cell line的表現似乎不太明顯喔。 03/27 17:37
3F：→ missoul:我也有這樣的疑問 可以減少RNA 卻不改變蛋白質 03/27 20:22
4F：→ chaunen:virus的好處適用於難transfect的細胞 03/27 23:24
5F：→ chaunen:可是copy數明顯比transfect來得少 03/27 23:27
6F：→ chaunen:如果HEK293T本來大量表現該基因 03/27 23:27
7F：→ chaunen:"大概"看不太出來吧 = =" (這樣講沒錯吧XD?) 03/27 23:28
8F：推 chaunen:調整 transfection的時間跟plasmid的量吧 03/27 23:33
9F：→ longko:也就是說transfection 單一shRNA plasmid 48H看不出差異嗎? 03/28 14:47
10F：→ chaunen:transfect效率好的話, 大概是還要更多時間XD??? 03/28 19:16