作者longko (观音兵)
看板Biotech
标题[求救] 请问lentivius的问题~~十万火急~~毕业困难
时间Sat Mar 27 16:54:14 2010
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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板上各位好
最近~~我开始使用lentivirus 系统~~我从中研院订购了几组shRNA~~再lentivirus前
先将几组shRNA利用transfection的方式将plasmid送到HEK-293T细胞，做knockdown
照理来说，会在western blot测试中，看到目标蛋白被抑制，可是几次结果下来，
并未看出差异。
我是使用invitrogen的Lipofectamine 2000将plasmid送入细胞，48小时候收蛋白，
过程中并无筛许，只有对照pEGFP-plasmid做为control。
而这几组shRNA中研院的测试结果都是有效的，所以在我pre-test的结果来看，该己
组shRNA就没有效果，请问各位前辈我有没有忽略什麽细节或少考虑了什麽。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 134.208.25.184
1F：→ terp:lentivirus shRNA 用感染的效果比较会出来,transfect比较没用 03/27 17:07
2F：推 aceliang:packaging cell line的表现似乎不太明显喔。 03/27 17:37
3F：→ missoul:我也有这样的疑问 可以减少RNA 却不改变蛋白质 03/27 20:22
4F：→ chaunen:virus的好处适用於难transfect的细胞 03/27 23:24
5F：→ chaunen:可是copy数明显比transfect来得少 03/27 23:27
6F：→ chaunen:如果HEK293T本来大量表现该基因 03/27 23:27
7F：→ chaunen:"大概"看不太出来吧 = =" (这样讲没错吧XD?) 03/27 23:28
8F：推 chaunen:调整 transfection的时间跟plasmid的量吧 03/27 23:33
9F：→ longko:也就是说transfection 单一shRNA plasmid 48H看不出差异吗? 03/28 14:47
10F：→ chaunen:transfect效率好的话, 大概是还要更多时间XD??? 03/28 19:16