作者iamrim (笨小孩~)
看板Biotech
標題[求救] 0.5% triton insoluble protein是不是很少?!
時間Wed Mar 24 00:38:26 2010
最近用polarized MDCK cell去作triton X-100 solubulity assay
看一些cytoskeleton-associated protein
用0.5% triton處理過後的細胞,絕大部分的protein都已經溶出(triton soluble)
剩下的pellet部份就是triton insoluble fraction
超難溶,用1% SDS去溶而且去測濃度(有時會sonicate/加熱很久)
濃度都很低
而且跑出來的band很像毛毛蟲,或常因protein量太少而壓不到band
很困擾....
不知有無辦法可改善insoluble fraction 的 western quality?!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.206.77
1F：推 trying1210:insouble protein本來就比較少 你說的低是多低？ 03/24 12:22
2F：→ trying1210:細胞可以養大盤一點試看看 03/24 12:25
3F：→ trying1210:我回溶pellet都是用RIPA mix均勻放冰上30min再sonicate 03/24 12:28
4F：→ trying1210:濃度是夠做WB的 如果還是不行可能你想看得蛋白本來就少 03/24 12:31
5F：→ trying1210:就用大well多load一點sample吧！ 03/24 12:32
6F：→ iamrim:10cm dish收下的insoluble protein約30-40ug 03/24 13:25