作者iamrim (笨小孩~)
看板Biotech
标题[求救] 0.5% triton insoluble protein是不是很少?!
时间Wed Mar 24 00:38:26 2010
最近用polarized MDCK cell去作triton X-100 solubulity assay
看一些cytoskeleton-associated protein
用0.5% triton处理过後的细胞,绝大部分的protein都已经溶出(triton soluble)
剩下的pellet部份就是triton insoluble fraction
超难溶,用1% SDS去溶而且去测浓度(有时会sonicate/加热很久)
浓度都很低
而且跑出来的band很像毛毛虫,或常因protein量太少而压不到band
很困扰....
不知有无办法可改善insoluble fraction 的 western quality?!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.206.77
1F：推 trying1210:insouble protein本来就比较少 你说的低是多低？ 03/24 12:22
2F：→ trying1210:细胞可以养大盘一点试看看 03/24 12:25
3F：→ trying1210:我回溶pellet都是用RIPA mix均匀放冰上30min再sonicate 03/24 12:28
4F：→ trying1210:浓度是够做WB的 如果还是不行可能你想看得蛋白本来就少 03/24 12:31
5F：→ trying1210:就用大well多load一点sample吧！ 03/24 12:32
6F：→ iamrim:10cm dish收下的insoluble protein约30-40ug 03/24 13:25