作者FDA (GeneTech)
看板Biotech
標題[求救] 為什麼ip myc-tag Ab不會抓到內生性myc
時間Mon Mar 22 18:06:46 2010
如題,想請問大家,myc-tag常常接在重組蛋白兩端
當我們將這重組蛋白的plasmid送入人類cell line
在用myc-tag Ab去做ip想看重組蛋白的表現量,以及
其他跟此重組蛋白有關的蛋白質,
那問題是,cell line往往myc就會大量表現
為什麼ip抓到的不是內生性myc而是重組蛋白
不懂
謝謝幫忙
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.49.38
1F：推 aggaci:如果確定有這段序列，那就是被擋住了，常有的事 03/22 19:58
2F：→ aggaci:只是tag常常都接尾巴或頭，接中間？第一次看到... 03/22 19:59
3F：→ aggaci:看表現亮直接做WB即可何必用到IP？ 03/22 20:00
4F：推 boblu:沒有看到說接中間啊？推測po應該也看跟該蛋白互動的成員? 03/22 22:25
5F：推 aggaci:Orz..看錯 03/22 22:40
6F：→ FDA:boblu說的對,我就是要看蛋白質間的互動 03/23 00:23
7F：→ sancra:因為你用來pull down的抗體是anti-tag? 03/23 11:58
8F：→ saviora:因為量差很大 你送進去的會比endogenous多很多 03/23 13:23
9F：→ FDA:是anti-myc,當ip的ab 03/24 09:21