作者snowfire (做自己)
看板Biotech
標題[討論] qPCR一問
時間Fri Mar 19 18:05:51 2010
qPCR的實驗流程
是先抽取出RNA
進行reverse transcription產出cDNA後再跑qPCR
想請問各位在跑qPCR之前的定量
會是以RNA的濃度為基準?
還是進行RT後的cDNA為基準?
其中量測濃度都是以NanoDrop進行
我有先爬文 但是好像都沒有看到相關的問題討論
目前我們實驗室出現兩派說法
一派是認為測RNA的量後就可以進行qPCR
因為測cDNA的量會受到管內過量的dNTP, primer, RNA, enzyme....因素影響吸光值
所以 cDNA的濃度是不準確的!!
一派是認為應該測定cDNA的量才進行qPCR
因為在RT的過程中 會有RT效率的不同
所以 應該以cDNA的濃度為準才對
我覺得兩方的講法都可以說的通
所以想問一下大家的想法是怎樣
謝謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.17
1F：→ untilnow:用RNA的量去測，RT效率問題...你應該不會一組實驗中用很 03/19 19:40
2F：→ untilnow:多不同的RT enzyme吧?同一次做的請視為一樣, 03/19 19:41
3F：推 aggaci:RNA的量為準 03/19 20:07
4F：→ aggaci:理想當然是策cDNA的量，但是dNTP的量>>cDNA 測出來不准 03/19 20:08
5F：推 ltck:同上 測RNA+1 這我們以前也有討論過 03/21 03:53
6F：推 cdkcyclin:可是qPCR不都會同時跑個internal control嗎?? 03/24 18:06
7F：→ monicatsen:RNA+1 03/26 00:48