作者snowfire (做自己)
看板Biotech
标题[讨论] qPCR一问
时间Fri Mar 19 18:05:51 2010
qPCR的实验流程
是先抽取出RNA
进行reverse transcription产出cDNA後再跑qPCR
想请问各位在跑qPCR之前的定量
会是以RNA的浓度为基准?
还是进行RT後的cDNA为基准?
其中量测浓度都是以NanoDrop进行
我有先爬文 但是好像都没有看到相关的问题讨论
目前我们实验室出现两派说法
一派是认为测RNA的量後就可以进行qPCR
因为测cDNA的量会受到管内过量的dNTP, primer, RNA, enzyme....因素影响吸光值
所以 cDNA的浓度是不准确的!!
一派是认为应该测定cDNA的量才进行qPCR
因为在RT的过程中 会有RT效率的不同
所以 应该以cDNA的浓度为准才对
我觉得两方的讲法都可以说的通
所以想问一下大家的想法是怎样
谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.17
1F：→ untilnow:用RNA的量去测，RT效率问题...你应该不会一组实验中用很 03/19 19:40
2F：→ untilnow:多不同的RT enzyme吧?同一次做的请视为一样, 03/19 19:41
3F：推 aggaci:RNA的量为准 03/19 20:07
4F：→ aggaci:理想当然是策cDNA的量，但是dNTP的量>>cDNA 测出来不准 03/19 20:08
5F：推 ltck:同上 测RNA+1 这我们以前也有讨论过 03/21 03:53
6F：推 cdkcyclin:可是qPCR不都会同时跑个internal control吗?? 03/24 18:06
7F：→ monicatsen:RNA+1 03/26 00:48