目前我已經好像找出問題了, 我染的CD11b似乎會受到固定液的影響而染不出來. 我想請教大家一下, 我做的是冷凍切片, 之前都是先以saline灌流後再接著以4%PFA灌流,灌完後取出腦組織, 然後放到蔗糖溶液脫水,脫水完後以OCT包埋,切片. 若是現在想不用PFA灌流的話, 是不是可以直接以saline灌流完後,取出組織泡在蔗糖溶液中,脫完水後以OCT包埋. 切片完後改以postfixation的方式固定. 這樣子的protocol不曉得是否可行? 麻煩大家了! ※ 引述《will008w (小花)》之銘言： : 不曉得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1) : 最近購入要染小鼠腦冷凍切片的microglia, : 但不曉得為什麼就是染不出來,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色. : 不曉得有沒有人有相關成功的經驗,麻煩不吝指教~ : 目前使用的方式如下: : 1.切完的片先放入-20度冷藏 : 2.取出片子先Aair dry : 3.PBS wash X 3, 每次五分鐘 : 4.3% H2O2 in methanol, 半個鐘頭 : 5.wash方式同步驟3 : 5.接著上一抗,濃度為100X稀釋, o/n : 6.PBS wash X 3,每次五分鐘 : 7.上2抗,放室溫一個鐘頭 : 8.wash方式同步驟3 : 9.加入ABC,45分鐘 : 10.最後以DAB呈色 : 是抗體出問題?還是步驟出問題? : 目前所使用的2抗為biotinylated anti rat,已放了將近7年的時間, : 不曉得是否會有影響? : 不曉得有沒有人願意分享經驗,麻煩了~~ -- --

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