目前我已经好像找出问题了, 我染的CD11b似乎会受到固定液的影响而染不出来. 我想请教大家一下, 我做的是冷冻切片, 之前都是先以saline灌流後再接着以4%PFA灌流,灌完後取出脑组织, 然後放到蔗糖溶液脱水,脱水完後以OCT包埋,切片. 若是现在想不用PFA灌流的话, 是不是可以直接以saline灌流完後,取出组织泡在蔗糖溶液中,脱完水後以OCT包埋. 切片完後改以postfixation的方式固定. 这样子的protocol不晓得是否可行? 麻烦大家了! ※ 引述《will008w (小花)》之铭言： : 不晓得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1) : 最近购入要染小鼠脑冷冻切片的microglia, : 但不晓得为什麽就是染不出来,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色. : 不晓得有没有人有相关成功的经验,麻烦不吝指教~ : 目前使用的方式如下: : 1.切完的片先放入-20度冷藏 : 2.取出片子先Aair dry : 3.PBS wash X 3, 每次五分钟 : 4.3% H2O2 in methanol, 半个钟头 : 5.wash方式同步骤3 : 5.接着上一抗,浓度为100X稀释, o/n : 6.PBS wash X 3,每次五分钟 : 7.上2抗,放室温一个钟头 : 8.wash方式同步骤3 : 9.加入ABC,45分钟 : 10.最後以DAB呈色 : 是抗体出问题?还是步骤出问题? : 目前所使用的2抗为biotinylated anti rat,已放了将近7年的时间, : 不晓得是否会有影响? : 不晓得有没有人愿意分享经验,麻烦了~~ -- --

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