作者jimmy900706 (熊)
看板Biotech
標題[求救] 關於western的二抗亂抓
時間Sun Mar 7 18:59:09 2010
小弟目前的實驗室很看重western
可是mouse的二抗(upstate)用1:5000 TBST稀釋後
常常會亂抓actin，強度又很強
所以那附近的band如果較弱，
壓片出來常常被actin的band蓋過去
不知道有沒有大大遇到這種問題？？
有沒有解決的辦法？？
目前我只想到剪membrane時把actin剪掉而已
或著換一家二抗看看？？(不過老師大概不會同意)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.154.12
1F：推 reeuentar:一次壓一種，分開壓 03/07 19:57
2F：推 bluecsky:同意 一次就做一種就好 尤其會亂認得話 03/07 22:30
3F：→ celestial318:Actin太強了...真的只能分開或剪掉 03/08 00:54
4F：推 reeuentar:押完第一個，elute掉，在押第二種，marker來標定位置 03/08 01:11
5F：→ jimmy900706:是說我沒hy actin的一抗，他就會自己跑出來 03/08 01:16
6F：→ jimmy900706:跑出來每個lane都差不多，不知該高興還難過 03/08 01:16
7F：→ jimmy900706:有人有遇過這種情形嗎......? 03/08 01:27
8F：→ saviora:你怕的話就跑兩張 要不然就是先壓弱的 03/08 07:10
9F：→ saviora:洗掉之後再壓actin 03/08 07:10
10F：推 tsubasawolfy:沒上ab還跑出來...換一家吧= = 03/08 10:49
11F：→ celestial318:...那是雜band吧= = 比例再稀釋或wash久一點試試 03/08 13:58
12F：推 migrant:你有reuse二抗嗎? 03/08 18:08
13F：推 haleywen:是actin嗎？還是heavy chain? 2抗確定有用對嗎？ 03/08 18:16
14F：→ jimmy900706:嗯，是actin..我想有真的可能是reuse的關係 03/08 20:03
15F：→ jimmy900706:因為我的actin二抗是mouse，而我的rabbit二抗好好的.. 03/08 20:04
16F：→ jimmy900706:重配再試看看好了(實驗室好窮..QQ) 03/08 20:04
17F：推 migrant:很可能是reuse的關係 一朝沾過anti-actin 終生anti-actin 03/08 20:55
18F：推 icome:所以二抗都通常不會reuse... 03/09 11:33
19F：推 iceking:二抗太濃,1:10000~20000即可,另外抗體真的不要reuse 03/09 17:40