作者jimmy900706 (熊)
看板Biotech
标题[求救] 关於western的二抗乱抓
时间Sun Mar 7 18:59:09 2010
小弟目前的实验室很看重western
可是mouse的二抗(upstate)用1:5000 TBST稀释後
常常会乱抓actin，强度又很强
所以那附近的band如果较弱，
压片出来常常被actin的band盖过去
不知道有没有大大遇到这种问题？？
有没有解决的办法？？
目前我只想到剪membrane时把actin剪掉而已
或着换一家二抗看看？？(不过老师大概不会同意)
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◆ From: 163.15.154.12
1F：推 reeuentar:一次压一种，分开压 03/07 19:57
2F：推 bluecsky:同意 一次就做一种就好 尤其会乱认得话 03/07 22:30
3F：→ celestial318:Actin太强了...真的只能分开或剪掉 03/08 00:54
4F：推 reeuentar:押完第一个，elute掉，在押第二种，marker来标定位置 03/08 01:11
5F：→ jimmy900706:是说我没hy actin的一抗，他就会自己跑出来 03/08 01:16
6F：→ jimmy900706:跑出来每个lane都差不多，不知该高兴还难过 03/08 01:16
7F：→ jimmy900706:有人有遇过这种情形吗......? 03/08 01:27
8F：→ saviora:你怕的话就跑两张 要不然就是先压弱的 03/08 07:10
9F：→ saviora:洗掉之後再压actin 03/08 07:10
10F：推 tsubasawolfy:没上ab还跑出来...换一家吧= = 03/08 10:49
11F：→ celestial318:...那是杂band吧= = 比例再稀释或wash久一点试试 03/08 13:58
12F：推 migrant:你有reuse二抗吗? 03/08 18:08
13F：推 haleywen:是actin吗？还是heavy chain? 2抗确定有用对吗？ 03/08 18:16
14F：→ jimmy900706:嗯，是actin..我想有真的可能是reuse的关系 03/08 20:03
15F：→ jimmy900706:因为我的actin二抗是mouse，而我的rabbit二抗好好的.. 03/08 20:04
16F：→ jimmy900706:重配再试看看好了(实验室好穷..QQ) 03/08 20:04
17F：推 migrant:很可能是reuse的关系 一朝沾过anti-actin 终生anti-actin 03/08 20:55
18F：推 icome:所以二抗都通常不会reuse... 03/09 11:33
19F：推 iceking:二抗太浓,1:10000~20000即可,另外抗体真的不要reuse 03/09 17:40