作者will008w (小花)
看板Biotech
標題[求救] 有關CD11b免疫組織染色
時間Fri Mar 5 00:31:33 2010
不曉得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1)
最近購入要染小鼠腦冷凍切片的microglia,
但不曉得為什麼就是染不出來,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色.
不曉得有沒有人有相關成功的經驗,麻煩不吝指教~
目前使用的方式如下:
1.切完的片先放入-20度冷藏
2.取出片子先Aair dry
3.PBS wash X 3, 每次五分鐘
4.3% H2O2 in methanol, 半個鐘頭
5.wash方式同步驟3
5.接著上一抗,濃度為100X稀釋, o/n
6.PBS wash X 3,每次五分鐘
7.上2抗,放室溫一個鐘頭
8.wash方式同步驟3
9.加入ABC,45分鐘
10.最後以DAB呈色
是抗體出問題?還是步驟出問題?
目前所使用的2抗為biotinylated anti rat,已放了將近7年的時間,
不曉得是否會有影響?
不曉得有沒有人願意分享經驗,麻煩了~~
--
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 115.43.209.159
※ 編輯: will008w 來自: 115.43.209.159 (03/05 00:37)
1F：推 lchd:沒有blocking? 03/05 02:52
2F：→ poiuhjkl:切完的片子請先固定晾乾後再冰至-80度存放,從-80冰箱 03/05 10:57
3F：→ poiuhjkl:取出時,稍微回溫至室溫後直接放入1X PBS中 03/05 10:59
4F：→ poiuhjkl:最好要做blocking, 還有你的ABC是啥東東?? avidin?? 03/05 11:00
5F：→ poiuhjkl:2抗放了7年,應該已經掛了,最好重新買過,如果可以,加上 03/05 11:01
6F：→ poiuhjkl:positve control 最好的~~ 03/05 11:02
7F：→ will008w:謝謝各位的幫忙~ABC是一種染色kit 03/05 17:16
8F：→ vandia:3%H2O2 30min會不會太久了? @@ 不會溶掉嗎? 03/05 22:09
9F：→ will008w:3%對於membrane裏頭的蛋白倒還好,但若是膜表面的蛋白, 03/08 17:10
10F：→ will008w:此濃度就會太高了 03/08 17:10