作者will008w (小花)
看板Biotech
标题[求救] 有关CD11b免疫组织染色
时间Fri Mar 5 00:31:33 2010
不晓得板上是否有同仁使用BD的rat anti-mouse CD11b (Mac-1)
最近购入要染小鼠脑冷冻切片的microglia,
但不晓得为什麽就是染不出来,目前使用的方式是以ABC+DAB呈色.
不晓得有没有人有相关成功的经验,麻烦不吝指教~
目前使用的方式如下:
1.切完的片先放入-20度冷藏
2.取出片子先Aair dry
3.PBS wash X 3, 每次五分钟
4.3% H2O2 in methanol, 半个钟头
5.wash方式同步骤3
5.接着上一抗,浓度为100X稀释, o/n
6.PBS wash X 3,每次五分钟
7.上2抗,放室温一个钟头
8.wash方式同步骤3
9.加入ABC,45分钟
10.最後以DAB呈色
是抗体出问题?还是步骤出问题?
目前所使用的2抗为biotinylated anti rat,已放了将近7年的时间,
不晓得是否会有影响?
不晓得有没有人愿意分享经验,麻烦了~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 115.43.209.159
※ 编辑: will008w 来自: 115.43.209.159 (03/05 00:37)
1F：推 lchd:没有blocking? 03/05 02:52
2F：→ poiuhjkl:切完的片子请先固定晾乾後再冰至-80度存放,从-80冰箱 03/05 10:57
3F：→ poiuhjkl:取出时,稍微回温至室温後直接放入1X PBS中 03/05 10:59
4F：→ poiuhjkl:最好要做blocking, 还有你的ABC是啥东东?? avidin?? 03/05 11:00
5F：→ poiuhjkl:2抗放了7年,应该已经挂了,最好重新买过,如果可以,加上 03/05 11:01
6F：→ poiuhjkl:positve control 最好的~~ 03/05 11:02
7F：→ will008w:谢谢各位的帮忙~ABC是一种染色kit 03/05 17:16
8F：→ vandia:3%H2O2 30min会不会太久了? @@ 不会溶掉吗? 03/05 22:09
9F：→ will008w:3%对於membrane里头的蛋白倒还好,但若是膜表面的蛋白, 03/08 17:10
10F：→ will008w:此浓度就会太高了 03/08 17:10