作者conan11 (民國的福爾摩斯)
看板Biotech
標題[方法] 限制酵素切不乾淨
時間Mon Feb 22 20:37:03 2010
我的sample是human tissue 的genomic DNA
用kit抽出DNA後還有用phenol和chloroform 再一次純化 確保histone被清除
接著取1000ng 用MspI 5Units 切在CC/GG的位置 總反應體積20ul
作用時間4小時 37度 digest後也加熱去活性了
但是問題就在於 我將切完的DNA拿去跑PCR還是有夾到band 雖然很微弱
而我的amplicon包含了一個MspI切位
想請教各位 是我的digestion步驟還有哪裡不夠完善嗎？
或是有過類似情況的版友可以分享一下 真的感激不盡
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◆ From: 140.116.61.1
1F：推 dankai:為你有說PCR結果微弱~應該是你的DNA品質不好!可能有phenol 02/22 21:15
2F：→ dankai:或chloroform殘留!!! 02/22 21:16
3F：→ conan11:恩....但是我也經過確實洗鹽處理了 應該也有可能 02/22 21:32
4F：推 lulusa:切割時間延長試試看吧 有的酵素要比較久的時間 02/22 22:22