作者conan11 (民国的福尔摩斯)
看板Biotech
标题[方法] 限制酵素切不乾净
时间Mon Feb 22 20:37:03 2010
我的sample是human tissue 的genomic DNA
用kit抽出DNA後还有用phenol和chloroform 再一次纯化 确保histone被清除
接着取1000ng 用MspI 5Units 切在CC/GG的位置 总反应体积20ul
作用时间4小时 37度 digest後也加热去活性了
但是问题就在於 我将切完的DNA拿去跑PCR还是有夹到band 虽然很微弱
而我的amplicon包含了一个MspI切位
想请教各位 是我的digestion步骤还有哪里不够完善吗？
或是有过类似情况的版友可以分享一下 真的感激不尽
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◆ From: 140.116.61.1
1F：推 dankai:为你有说PCR结果微弱~应该是你的DNA品质不好!可能有phenol 02/22 21:15
2F：→ dankai:或chloroform残留!!! 02/22 21:16
3F：→ conan11:恩....但是我也经过确实洗盐处理了 应该也有可能 02/22 21:32
4F：推 lulusa:切割时间延长试试看吧 有的酵素要比较久的时间 02/22 22:22