作者ycyyyy (green)
看板Biotech
標題Re: [方法] fibroblast primary culture
時間Mon Feb 8 17:47:15 2010
將組織切小塊
最好是薄片
貼於dish上
放入37 incubator30分鐘後
小心加入DMEM 10%FCS P/S
等fibroblast游出來
約1個星期內就可以看到細胞
※ 引述《reeuentar (我到底是什麼？)》之銘言：
: 有板友培養過人體肌肉中游離出的fibroblast cell嗎？
: 學姐留下來的protocol：
: 1. 用小剪刀將組織塊剪碎
: 2. PBS每ml加入5ug的collagenase IV，37度30~45分鐘取出上清液
: 4. 置入medium中
: 3. 重複步驟2兩次
: 問題是，之前的貼附率就不高，現在更慘，
: 我們用的是GIBICO low glucose的medium，10% FBS，預防感染會加入P/S，
: 之前最高是加到10%，也長的很好，最近就長不太起來，
: 有人有這方面的經驗嗎？
: 有地方要改進嗎？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.120.30
1F：推 JoyHuang:請問，貼在 dish上時，上面需要放PBS嗎？30min是乾乾的? 02/09 01:51
2F：→ ycyyyy:是乾的 才能貼的緊 02/09 01:59
3F：推 reeuentar:不會乾掉嗎？酵素處理過不是應該可以游離出更多嗎？ 02/09 09:53
4F：→ ycyyyy:我們實驗室不用酵素 用此方法養的很好 提供參考 02/09 10:54
5F：推 JoyHuang:加入DMEM時，檢體還在dish底部嗎？ 泡一個禮拜？ 02/09 15:48
6F：→ JoyHuang:（這個方法感覺很實用，忍不住想追問清楚。） 02/09 15:48
7F：→ ycyyyy:加入DMEM要小心不讓組織飄起 每三天換新DMEM 等細胞長出 02/09 22:42
8F：→ ycyyyy:一個星期後將組織夾起 待2天後分盤或是長滿後分盤 02/09 22:43