作者ycyyyy (green)
看板Biotech
标题Re: [方法] fibroblast primary culture
时间Mon Feb 8 17:47:15 2010
将组织切小块
最好是薄片
贴於dish上
放入37 incubator30分钟後
小心加入DMEM 10%FCS P/S
等fibroblast游出来
约1个星期内就可以看到细胞
※ 引述《reeuentar (我到底是什麽？)》之铭言：
: 有板友培养过人体肌肉中游离出的fibroblast cell吗？
: 学姐留下来的protocol：
: 1. 用小剪刀将组织块剪碎
: 2. PBS每ml加入5ug的collagenase IV，37度30~45分钟取出上清液
: 4. 置入medium中
: 3. 重复步骤2两次
: 问题是，之前的贴附率就不高，现在更惨，
: 我们用的是GIBICO low glucose的medium，10% FBS，预防感染会加入P/S，
: 之前最高是加到10%，也长的很好，最近就长不太起来，
: 有人有这方面的经验吗？
: 有地方要改进吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.120.30
1F：推 JoyHuang:请问，贴在 dish上时，上面需要放PBS吗？30min是乾乾的? 02/09 01:51
2F：→ ycyyyy:是乾的 才能贴的紧 02/09 01:59
3F：推 reeuentar:不会乾掉吗？酵素处理过不是应该可以游离出更多吗？ 02/09 09:53
4F：→ ycyyyy:我们实验室不用酵素 用此方法养的很好 提供参考 02/09 10:54
5F：推 JoyHuang:加入DMEM时，检体还在dish底部吗？ 泡一个礼拜？ 02/09 15:48
6F：→ JoyHuang:（这个方法感觉很实用，忍不住想追问清楚。） 02/09 15:48
7F：→ ycyyyy:加入DMEM要小心不让组织飘起 每三天换新DMEM 等细胞长出 02/09 22:42
8F：→ ycyyyy:一个星期後将组织夹起 待2天後分盘或是长满後分盘 02/09 22:43