※ 引述《pei24 (黑哥)》之銘言： : To 前輩們... : 我把我切片染色的照片 po 在 http://www.wretch.cc/album/peipink : 麻煩前輩們給予指教..... : 我實驗室的perfusion protocol為以下 : saline 50 ml(流速約為 6 ml/min) : 4% PFA 100-200 ml(流速約為 4 ml/min) : 10% sucrose 50ml (流速約為 4 ml/min) : 取出 spinal cord 之後會把 L4-L6 切斷 : 泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 約3天 : 用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T變白後再放在-80 : 至於切片時我的刀片每換一個組織我就換新的刀片 : 在切片的過程中也會不斷的換刀片的位置... : 請給予指教!! 因為沒有明視野的照片 還有照片倍率？ 其實有點難看出破洞的地方到底是破洞還是空洞 我是沒有切過脊椎 不過我有一個小小問題想請教 切片組織是脊椎 那做perfusion的意義在哪邊？ 我知道要做一些充血組織或是血管內皮是一定要灌流 可是脊椎那邊有血管嘛？ 我的意思是灌流的成效可以到達spinal cord嘛 如果不行,那是不是應該改成儘快取出組織泡入固定液？ 另外取組織跟固定過程中 是不是有都維持在低溫的狀態呢 因為我自己的經驗 如果組織離體超過5分鐘沒儘快固定 在tem下就常常會看到很多lysis了 這會不會是你的破洞來源 其實我也沒啥把握啦 提出這些看法 看看大家還有沒有其他的建議呢 JR --

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