※ 引述《pei24 (黑哥)》之铭言： : To 前辈们... : 我把我切片染色的照片 po 在 http://www.wretch.cc/album/peipink : 麻烦前辈们给予指教..... : 我实验室的perfusion protocol为以下 : saline 50 ml(流速约为 6 ml/min) : 4% PFA 100-200 ml(流速约为 4 ml/min) : 10% sucrose 50ml (流速约为 4 ml/min) : 取出 spinal cord 之後会把 L4-L6 切断 : 泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 约3天 : 用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T变白後再放在-80 : 至於切片时我的刀片每换一个组织我就换新的刀片 : 在切片的过程中也会不断的换刀片的位置... : 请给予指教!! 因为没有明视野的照片 还有照片倍率？ 其实有点难看出破洞的地方到底是破洞还是空洞 我是没有切过脊椎 不过我有一个小小问题想请教 切片组织是脊椎 那做perfusion的意义在哪边？ 我知道要做一些充血组织或是血管内皮是一定要灌流 可是脊椎那边有血管嘛？ 我的意思是灌流的成效可以到达spinal cord嘛 如果不行,那是不是应该改成尽快取出组织泡入固定液？ 另外取组织跟固定过程中 是不是有都维持在低温的状态呢 因为我自己的经验 如果组织离体超过5分钟没尽快固定 在tem下就常常会看到很多lysis了 这会不会是你的破洞来源 其实我也没啥把握啦 提出这些看法 看看大家还有没有其他的建议呢 JR --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 59.126.67.14