作者pei24 (黑哥)
看板Biotech
標題Re: [求救] 切片破洞很久了!!!請幫幫我
時間Thu Feb 4 15:38:14 2010
※ 引述《pei24 (黑哥)》之銘言：
: 請問各位實驗經驗豐富的前輩
: 1. 組織可以不經由perfusion,直接取下來泡在 4% PFA內嗎???
: 泡完 4% PFA之後再泡30% sucrose....再進行冷凍切片
: 2. 組織是小鼠的spinal cord L4-L6, 這樣泡在 4% PFA內至少需要多少小時??溫度??
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: 由於我的切片破片已經持續一個半月了 我不想再繼續破下去了..
: 覺得perfusion很耗時
: 因此才想說有沒有可以不經由perfusion直接來個固定的方法?
: 希望各位前輩給予指教...
: PS:依照我實驗室的perfusion protocol,一隻小鼠需要耗時1.5小時
: 實在是很耗時...../_\ (一天灌個幾隻就天黑了)
To 前輩們...
我把我切片染色的照片 po 在
http://www.wretch.cc/album/peipink
麻煩前輩們給予指教.....
我實驗室的perfusion protocol為以下
saline 50 ml(流速約為 6 ml/min)
4% PFA 100-200 ml(流速約為 4 ml/min)
10% sucrose 50ml (流速約為 4 ml/min)
取出 spinal cord 之後會把 L4-L6 切斷
泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 約3天
用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T變白後再放在-80
至於切片時我的刀片每換一個組織我就換新的刀片
在切片的過程中也會不斷的換刀片的位置...
請給予指教!!
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◆ From: 192.192.90.35
2F：→ jsi:網頁內容說到維持spinal cord筆直、避免彎曲可得到較好的結果 02/05 02:01
3F：→ jsi:版上之前也有切片破洞文章 可參考看看內容 搜尋"切片破洞" 02/05 02:06