作者pei24 (黑哥)
看板Biotech
标题Re: [求救] 切片破洞很久了!!!请帮帮我
时间Thu Feb 4 15:38:14 2010
※ 引述《pei24 (黑哥)》之铭言：
: 请问各位实验经验丰富的前辈
: 1. 组织可以不经由perfusion,直接取下来泡在 4% PFA内吗???
: 泡完 4% PFA之後再泡30% sucrose....再进行冷冻切片
: 2. 组织是小鼠的spinal cord L4-L6, 这样泡在 4% PFA内至少需要多少小时??温度??
: -------------------------------------------------------
: 由於我的切片破片已经持续一个半月了 我不想再继续破下去了..
: 觉得perfusion很耗时
: 因此才想说有没有可以不经由perfusion直接来个固定的方法?
: 希望各位前辈给予指教...
: PS:依照我实验室的perfusion protocol,一只小鼠需要耗时1.5小时
: 实在是很耗时...../_\ (一天灌个几只就天黑了)
To 前辈们...
我把我切片染色的照片 po 在
http://www.wretch.cc/album/peipink
麻烦前辈们给予指教.....
我实验室的perfusion protocol为以下
saline 50 ml(流速约为 6 ml/min)
4% PFA 100-200 ml(流速约为 4 ml/min)
10% sucrose 50ml (流速约为 4 ml/min)
取出 spinal cord 之後会把 L4-L6 切断
泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 约3天
用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T变白後再放在-80
至於切片时我的刀片每换一个组织我就换新的刀片
在切片的过程中也会不断的换刀片的位置...
请给予指教!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.90.35
2F：→ jsi:网页内容说到维持spinal cord笔直、避免弯曲可得到较好的结果 02/05 02:01
3F：→ jsi:版上之前也有切片破洞文章 可参考看看内容 搜寻"切片破洞" 02/05 02:06